GMP潔凈區沉降菌測試方法及測試記錄表

GMP潔凈區沉降菌測試方法及測試記錄表

1.目的：GMP潔凈區沉降菌測試方法及測試記錄表 闡述潔凈室空氣中沉降菌檢測操作規程，保證藥品質(zhì)量，防止生產(chǎn)環(huán)境對產(chǎn)品的污染。

2.范圍：適用于本公司潔凈區(室)的沉降菌的監測。

3.責任：沉降菌檢測員。

4.內容：GMP潔凈區沉降菌測試方法及測試記錄表

4.1基本概念：

4.1.1菌落:細菌培養后,由一個(gè)或幾個(gè)細菌繁殖而形成的一細菌集落,簡(jiǎn)稱(chēng)CFU.通常用個(gè)數表示。

4.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010提及的方法收集空氣中的活性微生物粒子，通過(guò)專(zhuān)門(mén)的培養基在適宜的生長(cháng)條件下繁殖到可見(jiàn)的菌落數。

4.1.3沉降菌菌落數:規定時(shí)間內每個(gè)平板培養皿收集到空氣中沉降菌的數目，以個(gè)/皿表示。

4.2測試原理:本測試方法利用沉降法，即通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落數，以平板培養皿中的菌落數來(lái)評定潔凈環(huán)境內的活微生物數，并以此來(lái)評定潔凈區的潔凈度。

4.3測試方法：

4.3.1使用的儀器設備和培養基:

    高壓消毒鍋:使用時(shí)應嚴格按照操作規程進(jìn)行。

    恒溫培養箱:必須定期對培養箱的溫度計進(jìn)行檢定。

    培養皿:一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培養皿。使用前將培養皿置于121℃濕熱滅菌20min。

    培養基:胰酪大豆胨瓊脂培養基。

將培養基加熱熔化，冷卻至約45℃在無(wú)菌操作條件下將培養基注入培養皿，每皿約15ml。待瓊脂培養基凝固后，將培養基平皿放入32℃恒溫培養箱中培養72小時(shí)若培養基平皿上確無(wú)菌落生長(cháng)即可供采樣用，制備好的培養基平皿應在2-8℃的壞境中存放。

4.3.2測試時(shí)間:

    對單向流，如A級凈化房間內及層流工作臺，測試應在凈化空調系統正常運行不少于10分鐘后開(kāi)始。

    對非單向流，如B級、C級、D級以上的凈化房間，測試應在凈化空調系統正常運行不少于30分鐘開(kāi)始。

4.3.3采樣點(diǎn)數目及其布置:

采樣點(diǎn)數目下限值:沉降菌的采樣點(diǎn)數下限值可按表1確定。在滿(mǎn)足蕞少測點(diǎn)數的同時(shí)，不宜滿(mǎn)足蕞少培養皿數，見(jiàn)表2

表1 采樣點(diǎn)數下限值

表2 培養皿數下限值

    采樣點(diǎn)的布置:

    除受潔凈區的設備限制外，取樣點(diǎn)應在整個(gè)潔凈區均勻布置。

    在日常監控時(shí)，那些與產(chǎn)品相鄰近的區域，以及可能與產(chǎn)品直接接觸的空氣及設備附近應考慮增加取樣點(diǎn)和取樣次數(與產(chǎn)品非接觸區相比，這些區域應視為關(guān)鍵區):人員活動(dòng)頻繁或人員較集中的區域也應視為關(guān)鍵區，需加強監控。

    取樣點(diǎn)一股布置在趾離地面0.8-1.0m之間或操作平臺的高度。

    取樣時(shí)，取樣沒(méi)備會(huì )對氣流產(chǎn)生干擾，取樣時(shí)應避免可能對氣流組織的干擾。

    盡量避免在回風(fēng)口附近取樣(距離lm以上)，且測試人員應在取樣口的下風(fēng)側，并盡量少走動(dòng)。

4.3.4測試步驟：

4.3.4.1采樣方法:

    用無(wú)菌容器(如不銹鋼儲槽)將預先培養的培養皿(無(wú)菌平皿)帶至待測區，將培養皿取出，放置在預先確定取樣點(diǎn)，打開(kāi)培養皿蓋，使培養基表面暴露0.5小時(shí)，再將培養皿蓋上，蓋后倒置。檢測時(shí)記下培養皿打開(kāi)的起始時(shí)間和結束時(shí)間。

4.3.4.2培養：

全部采樣結束，將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養。32℃培養，時(shí)間為72小時(shí)。

每批培養基應有對照試驗，檢查培養基本身是否污染，可每批選定三個(gè)培養皿做對照培養。

4.3.4.3菌落計數:

    用肉眼直接計數，然后用5-10倍放大鏡檢查，是否有遺漏。若培養皿上有2個(gè)或2個(gè)以上菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上計數。

4.3.5注意事項：

    測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。

    采取一切措施防止人為對樣本的污染。

    對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。

由于細菌種類(lèi)繁多，差別甚大，計數時(shí)一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀(guān)察，不要漏計培養皿邊緣生長(cháng)的菌落，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。

    采樣前應仔細檢查每個(gè)培養皿的質(zhì)量，如發(fā)現變質(zhì)、破損或污染的應剔除。

測試狀態(tài):

    沉降菌測試前，被測試潔凈區的溫濕度須達到規定的要求，靜壓差必須控制在規定值內。

    沉降菌測試前，被測試潔凈區己經(jīng)過(guò)消毒。

    測試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，在空調系統驗流時(shí)、長(cháng)期停產(chǎn)恢復生產(chǎn)前、設施設備大修復產(chǎn)前進(jìn)行靜態(tài)測試，在日常監測時(shí)進(jìn)行動(dòng)態(tài)監測。

    測試人員:測試人員必須穿戴符合環(huán)境級別的工作服。靜態(tài)測試時(shí)，室內測試人員不得多于2個(gè)人。

結果計算:

用計數方法得出各個(gè)培養皿的菌落數。

平均菌落數的汁算見(jiàn)下式:

計算公式：

M =（M1+M2+…+MN）/n

式中M為平均菌落數（CFU）

Mi表示1，2，3，……n號平皿菌落數；n表示平皿總數。

6．標準：

7.結果評定:

    用平均菌落數判斷潔凈室的空氣中的微生物。

    潔凈區內的平均菌落數必須符合所選定的評定標準。

    若某潔凈區的菌落數超過(guò)評定標準，則必須對此區域先行消毒，然后重新測試兩次，測試結果必須合格。

8.偏差糾正

    一旦發(fā)現空氣微生物監測結果超標，一般可以采取以下行動(dòng)進(jìn)行調查和評估:

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